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    2013 - 11 - 29
    麦克奥迪显微镜脱水与样品附着:由于多次离心使细胞丢失,光学显微镜因此最好先将细胞附着在玻片或塑料片表面,使细胞随同该玻片或塑料片一起脱水、干燥。光学显微镜对玻片厚度的要求为使细胞能附着在玻片或塑料片,需先在玻片或塑料片上铺设一层膜,铺膜方法如下:(1)光学显微镜最简单的方法是铺一层薄的聚乙烯醉缩甲醛(formvar )膜。将洗净的玻片在(0.5-1)%聚乙烯醉缩甲醛氯仿溶液中浸葵,待氛仿挥发后玻片上呈现一层白膜,将玻片在抓仿中振荡几次使膜变薄即可用。(2)将0.1纬多聚L-赖氨酸(制备时将1mg多聚赖氨酸溶于l ml过滤后的水中)滴在洗净的玻片上,待液滴展开后在450C供箱中干燥。此种方法最好,因为多聚L-赖氨酸带正电荷,能使较多的表面带负电荷的细胞附着。(3)麦克奥迪显微镜将血浆和甘油各以(30--40)%,光学显微镜对玻片厚度的要求和((3-5)%的比例加到蒸馏水中,成为甘油蛋白液。将该液滴在洗净的玻片上,光学显微镜展开并烘干。将铺好的蛋白膜浸入2%戊二醛中使蛋白固定,洗净后干燥可备用。使用前将血浆滴在该蛋白膜上使之“活化”, 30分钟后用缓冲液冲洗,便可直接应用。数码显微镜将固定与清洗后的细胞用过滤后的水制成浓度适宜的细胞悬液,光学显微镜悬滴在已铺好膜的玻片或塑料片上,在湿润、低温(40C)环境中放置(30-120)分钟,使细胞附着到膜上。用细镊子夹起玻片在清洁的双蒸水中振荡,光学显微镜洗去未附着的细胞。光学显微镜对玻片厚度的要求偏光显微镜然后迅速放入盛有50%丙酮〔或乙醉)的器皿中。脱水过程是将玻片每隔约3分钟,依次放入浓度递增的丙酮或乙醉中,光学显微镜或在放玻片的器皿中不断增加脱水剂浓度。据作者所在实验室经验,后一种操作比较方便。光学显微镜具体做法可每隔3分钟将器皿中的脱水剂吸出一半,再加入浓度为100%的等量脱水剂。经过5-6次操作,光学显微镜对玻片厚度的要求显微镜价格器皿中脱水剂浓度达0.5%以上,细胞脱水成功。临界点干燥后将玻片或塑料片用导电胶粘于样品墩上进行金属镀膜。利用第三种方法铺设的膜附着细胞也有方便之处。光学显微镜可将经低浓度戊二醛固定后的细胞悬滴在“活化”后的蛋白膜上,光学显微镜对玻片厚度的要求放置10分钟,将玻片或塑料片浸于2%戊二醛中,30分钟后用过滤双蒸水冲清,再按上述方法脱水、干操及金属镀膜。
  • 2015 - 12 - 12
    【显微镜使用方法】1.低倍镜的使用方法(1)取镜和放置:显微镜平时存放在柜或箱中,用时从柜中取出,右手紧握镜臂,左一手托住镜座,将显微镜放在自己左肩前方的实验台上,镜座后端距桌边1-2寸为宜,便于坐着操作。(2)对光:用拇指和中指移动旋转器(切忌手持物镜移动),使低倍镜对准镜台的通光孔(当转动听到碰叩声时,说明物镜光轴已对准镜筒中心)。打开光圈,上升集光器,并将反光镜转向光源,以左眼在目镜上观察(右眼睁开),同时调节反光镜方向,直到视野内的光线均匀明亮为止。(3)放置玻片标本:取一玻片标本放在镜台上,一定使有盖玻片的一面朝上,切不可放反,用推片器弹簧夹夹住,然后旋转推片器螺旋,将所要观察的部位调到通光孔的正中。(4)调节焦距:以左手按逆时针方向转动粗调节器,使镜台缓慢地上升至物镜距标本片约5毫米处,应注意在上升镜台时,切勿在目镜上观察。一定要从右侧看着镜台上升,以免上升过多,造成镜头或标本片的损坏。然后,两眼同时睁开,用左眼在目镜上观察,左手顺时针方向缓慢转动粗调节器,使镜台缓慢下降,直到视野中出现清晰的物象为止。如果物象不在视野中心,可调节推片器将其调到中心(注意移动玻片的方向与视野物象移动的方向是相反的)。如果视野内的亮度不合适,可通过升降集光器的位置或开闭光圈的大小来调节,如果在调节焦距时,镜台下降已超过工作距离(5.40mm)而未见到物象,说明此次操作失败,则应重新操作,切不可心急而盲目地上升镜台。2.高倍镜的使用方法(1)选好目标:一定要先在低倍镜下把需进一步观察的部位调到中心,同时把物象调节到最清晰的程度,才能进行高倍镜的观察。(2)转动转换器,调换上高倍镜头,转换高倍镜时转动速度要慢,并从侧面进行观察(防止高倍镜头碰撞玻片),如高倍镜头碰到玻片,说明低倍镜的焦距没有调好,应重新操作。(3)调节焦距:转换好高倍镜后,用左眼在目镜上观察,此时一般能见到一个不太清楚的物象,可将细调节器的螺旋逆时针移动约0.5-1圈,即可获得清晰的物象(切勿用粗调节器!)如果视野的亮度不合适,可用集光器和光圈加以调节,如果需要更换玻片标本时,必须顺时针(切勿转错方向)转动粗调节器使镜台下降,方可取下玻片标本。【显微镜使用的注意事项】1.持镜时必须是右手握臂、左手托座的姿势,不可单手提取,以免零件脱落或碰撞到其它地方。2.轻拿轻放,不可把显微镜放置在实验台的边缘,以免碰翻落地。...
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    2013 - 11 - 29
    显微镜成象受各种象差的影响,显微镜的主要光学部件是物镜,而物镜有各种各样的型号,比如消色差物镜,平场物镜等等,这些物镜都是对应于要消除某种象差,从而提高成像质量的,例如消色差物镜是用来消除色差,平场物镜是用来消除场曲的.下面就介绍一下显微镜一般存在的象差。一 色差(Chromatic aberration)发生在多色光为光源的情况下,单色光不产生色差。白光由红 橙 黄 绿 青 蓝 紫 七种组成,各种光的波长不同 ,所以在通过透镜时的折射率也不同,这样物方一个点,在象方则可能形成一个色斑。消除方法:使用单色光(加入滤光片),光学设计消除色差二 球差(Spherical aberration)球差是轴上点的单色相差,是由于透镜的球形表面造成的。球差造成的结果是,一个点成像后,不在是个亮点,而是一个中间亮 边缘逐渐模糊的亮斑。从而影响成像质量。消除方法:使用凸、凹透镜组合球差三 慧差(Coma)慧差属轴外点的单色相差。轴外物点以大孔径光束成象时,发出的光束通过透镜后,不再相交一点,则一光点的象便会得到一逗点壮,型如慧星,故称"慧差"。消除方法:使用轴向平行光彗差四 象散(Astigmatism)象散也是影响清晰度的轴外点单色相差。当视场很大时,边缘上的物点离光轴远,光束倾斜大,经透镜后则引起象散。象散使原来的物点在成象后变成两个分离并且相互垂直的短线,在理想象平面上综合后,形成一个椭圆形的斑点。消除方法:通过复杂的透镜组合来消除。五 场曲(Curvature of field)“象场弯曲”。当透镜存在场曲时,整个光束的交点不与理想象点重合,虽然在每个特定点都能得到清晰的象点,但整个象平面则是一个曲面。这样在镜检时不能同时看清整个相面,给观察和照相造成困难。研究用显微镜的物镜一般都是平场物镜,这种物镜已经矫正了场曲。场曲六 畸变(Distortion)前面所说各种相差除场曲外,都影响象的清晰度。畸变是另一种性质的相差,光束的同心性不受到破坏。因此,不影响象的清晰度,但使象与原物体比,在形状上造成失真。畸变
    2015 - 12 - 12
    显微镜是生物教学实验中常用的一种精密光学仪器,由机械系统和光学系统两部分组成。机械系统包括:镜筒传动部分、物镜转动部分、载物台、压片夹和遮光器的转换部分、镜架和底座的转动部分等。光学系统包括:目镜、物镜、聚光镜和反光镜等。维护和保养:(1)整体保养:显微镜要放置在干燥阴凉、无尘、无腐蚀的地方。使用后,要立即擦拭干净,用防尘透气罩罩好或放在箱子内。(2)机械系统的维护保养:使用后,用干净细布擦净,定期在滑动部位涂些中性润滑脂。如有严重污染,可先用汽油洗净后再擦干。但切忌用酒精或乙醚清洗,因为这些试剂会腐蚀机械和油漆,造成损坏。(3) 光学系统的维护保养:使用后,用干净柔软的绸布轻轻擦拭目镜和物镜的镜片。有擦不掉的污迹时,可用长纤维脱脂棉或干净的细棉布蘸少些二甲笨或镜头清洗液 (3份酒精∶1份乙醚)擦拭。然后用干净细软的绸布擦干或用吹风球吹干即可。要注意的是清洗液千万不能渗入到物镜镜片内部,否则会损坏物镜镜片。聚光镜 (XSP-13A、16A型才有)和反光镜用后只要擦干净就可以了。
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